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Béla, Samantha Ribeiro (2007)
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Languages: Portuguese
Types: Master thesis
Subjects: Toxoplasmose, Toxoplasma gondii, Avidez de anticorpo, Antígeno recombinante, Antígeno SAG2A, Diagnóstico sorológico, Subclasse de IgG, Antibody avidity, IgG subclasses, Recombinant antigen, SAG2A antigen, Serological diagnosis, :CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA [CNPQ]
Proteínas recombinantes têm sido utilizadas para o diagnóstico sorológico da infecção por Toxoplasma gondii para diferenciar entre as fases aguda e crônica da toxoplasmose. Neste estudo, foi avaliada a reatividade de anticorpos IgG e IgG1 através de imunoensaios em soros de pacientes com toxoplasmose aguda e crônica dirigidos contra dois antígenos recombinantes clonados e expressos em E. coli, SAG2A (molécula recombinante total) e SAG2A(DELTA) (molécula recombinante deletada do epítopo reconhecido pelo anticorpo monoclonal A4D12). A performance de ambos os antígenos recombinantes foi comparada com o antígeno solúvel de Toxoplasma (STAg). Os resultados demonstraram uma maior reatividade de anticorpos IgG em amostras de soros provenientes de pacientes de fase aguda com ambos os antígenos STAg e SAG2A quando comparados com amostras de soros de fase crônica, sendo esta diferença ainda mais evidente quando avaliada a reatividade de anticorpos IgG1 para o antígeno SAG2a. Baixa reatividade foi encontrada para soros humanos de fases aguda e crônica quando foi utilizado o antígeno SAG2A(DELTA). Uma alta sensibilidade (95%) e alta especificidade (100%) foram demonstradas pelo ELISA-IgG-SAG2A. Analisando separadamente a sensibilidade do ELISA-IgG1-SAG2A para as fases aguda e crônica, foram encontrados valores altamente significantes para a fase aguda (90%) do que para a fase crônica (67%) da infecção. O ensaio ELISA-IgG avidez utilizando STAg foi melhor para caracterizar amostras de soros com alta avidez, enquanto que para este mesmo propósito o ensaio ELISA-IgG1 utilizando SAG2A mostrou melhor performance. Pode-se concluir que o ELISA-IgG1 utilizando SAG2A mostrou ser potencial ferramenta de diagnóstico para caracterizar a fase aguda da infecção por T. gondii, sendo esta a primeira vez que o antígeno SAG2A recombinante é proposto como um marcador molecular para detectar níveis e avidez de IgG1 e que o epítopo reconhecido pelo anticorpo monoclonal A4D12 mostrou ser crítico e essencial para sua aplicação em imunoensaios com finalidades diagnósticas. Recombinant proteins have been used for the serological diagnosis of Toxoplasma gondii infection to differentiate between the acute and chronic phases of toxoplasmosis. In this study, we evaluated the reactivity of IgG and IgG1 antibodies by immunoassays in acute and chronic phase sera from patients with toxoplasmosis against two recombinant antigens cloned and expressed in E. coli, SAG2A (full recombinant molecule) and SAG2A(DELTA) (truncated recombinant molecule deleted from the epitope recognized by A4D12 mAb). The performance of both recombinant antigens was compared with the soluble Toxoplasma antigen (STAg). Results demonstrated a higher IgG reactivity in acute sera with both STAg and SAG2A than in chronic phase sera and this difference was more evident for IgG1 antibodies to SAG2A antigen. Low reactivity to SAG2A(DELTA) antigen was found in human sera from acute or chronic phases. A high sensitivity (95%) and specificity (100%) was found for the indirect ELISA-IgGSAG2A. ELISA-IgG1-SAG2A sensitivity was analyzed separately for acute or chronic phase, showing values significantly higher for acute (90%) than for chronic (67%) phases. ELISA-IgG avidity using STAG was better for charactering sera with high avidity, while the ELISA-IgG1 using SAG2A was the best for this purpose. In conclusion, ELISA-IgG1-SAG2A may be a potential diagnostic tool to characterize the acute phase T. gondii infection. This is the first time that recombinat SAG2A antigen has been proposed as a molecular marker and the epitope recognized by the A4D12 mAb showed to be critical and valuable for application in diagnostic procedures.