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RODAS GARRIDO, PAULA (2012)
Languages: Spanish; Castilian
Types: Doctoral thesis
Subjects: CIENCIAS NATURALES, BIOQUIMICA
Salmonella enterica incluye a un amplio grupo de microorganismos Gram-negativos y patógenos intracelulares facultativos que infectan un amplio rango de hospederos y causan una variedad de enfermedades que van desde una gastroenteritis limitada hasta una severa infección sistémica. De ellos, Salmonella enterica serovar Typhi (S. Typhi) infecta exclusivamente al ser humano y ha demostrado ser un patógeno altamente adaptado a su hospedero, siendo el agente etiológico de la fiebre tifoidea, una patología sistémica que se manifiesta mediante fiebre alta, decaimiento generalizado y dolor abdominal. Se ha sugerido que la restricción de hospedero que caracteriza a S. Typhi pudo haber ocurrido por la adquisición de material genético a través de plasmidios, profagos e islas genómicas, o bien mediante pseudogenización y/o degradación genómica. De hecho, S. Typhi comparada con el serovar filogenéticamente más relacionado (S. Typhimurium) posee un alto número de pseudogenes y ha adquirido material genético presente sólo en su genoma. Un ejemplo de ello es la isla genómica GICT18/1 recientemente caracterizada en nuestro laboratorio, que está inserta dentro del operón de resistencia a péptidos antimicrobianos sap causando la pérdida de la resistencia al péptido protamina. GICT18/l contiene nueve marcos de lectura abiertos (STY1358-STY1367), de los cuales tres han sido anotados como pseudogenes y/o genes remanentes de fagos (STY1358, STY1365 y STY1366), cinco de ellos son codifican proteínas de funciones desconocidas o hipotéticas (STY1359, STY1360, STY1361 , STY1364 y STY1367) mientras que uno de ellos aparece anotado como un pseudo gen de la subunidad S 1 (pltA) de la toxina PTX de Bordetella pertussis. Aún cuando ninguno de estos genes hipotéticos ha sido caracterizado, estudios previos señalan que de ellos STY 1362, STY 1364 y STY1365 son transcripcionalmente regulados una vez que la bacteria ingresa a macrófagos humanos, lo que sugiere que estos ORFs son expresados y que participarían en la patogenicidad de la bacteria. Además, presentan segmentos de transmembrana y secuencias de destinación a periplasma que sugieren una localización y función a nivel de la envoltura bacteriana. El objetivo de este trabajo fue caracterizar estos tres genes hipotéticos de S. Typhi en el contexto de patogenicidad y la envoltura bacteriana. Los resultados obtenidos en este estudio mostraron que la ausencia de estos marcos de lectura no afectó la capacidad invasiva y proliferativa de S. Typhi en la línea monocítica humana U937. Sin embargo, se transcriben en todas las condiciones ambientales de crecimiento probadas en este estudio, que incluyeron tanto las señales ambientales propias del ambiente intracelular del macrófago (pH ácido y baja disponibilidad de Mg2+) como el medio corriente de crecimiento (pH7). Además, STY 1362 y STY 1364 forman una sola unidad transcripcional, mientras que STY1365 se transcribe tanto de manera independiente a ambos marcos de lectura abiertos como en la misma molécula de RNAm. La activación de los promotores para STY1362 y STY1365 mostró que la transcripción de estos es constitutiva a lo largo del crecimiento bacteriano, siendo elevada en fases tempranas del crecimiento. La detección de las proteínas codificadas por estos tres marcos de lectura abierto mediante fusiones con el epítope 3XFLAG y Western Blotting mostró que STY1362 y STY1364 están presentes en fracciones de membrana y periplasma por separado, pero además se detectó la señal de una proteína única de tamaño mayor ( ~ 40 kDa) en el sobrenadante bacteriano, dando cuenta de la traducción de STY1362 y STY1364 como una sola proteína. En cuanto a la proteína codificada por STY1365, ésta fue detectada mayoritariamente en fracciones de membrana interna. Si bien los experimentos de exposición frente a diversos agentes estresantes de membrana (SDS, polimixina, EDTA y cristal violeta) no arrojaron diferencias significativas cuando STY1362 y STY1364 están ausentes de la bacteria, en el caso de STY1365 se observó que la sobreexpresión de la proteína codificada por este marco de lectura abierto provocaba un retardo en el crecimiento bacteriano, captación del colorante cristal violeta y una alteración en el perfil de proteínas de membrana externa, todas características asociadas a proteínas clasificadas como holinas descritas en bacteriófagos. A partir de estos resultados, se concluye que los marcos de lectura abiertos STY1362, STY1364 y STY1365 de la isla genómica GICT18/1 de S. Typhi corresponden a genes que codifican proteínas de la envoltura bacteriana que no participan en la patogénesis de la bacteria en macrófagos. El significado biológico de la expresión de estos marcos de lectura abiertos queda aún por ser resuelto.
  • No references.
  • No related research data.
  • No similar publications.